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點(diǎn)擊化學(xué)蛋白質(zhì)熒光標(biāo)記

閱讀次數(shù)：1304 發(fā)布時(shí)間：2013/7/24 8:44:38

基于基因編碼非天然氨基酸的光點(diǎn)擊化學(xué)蛋白質(zhì)熒光標(biāo)記具有以下的優(yōu)點(diǎn)：1）反應(yīng)速率快（達(dá)到50 M-1s-1）; 2）光驅(qū)動(dòng)的蛋白質(zhì)時(shí)空分辨標(biāo)記;3）點(diǎn)擊化學(xué)反應(yīng)引發(fā)的熒光基團(tuán)生成，背景噪音低;4）光點(diǎn)擊活性非天然氨基酸的蛋白質(zhì)定點(diǎn)插入對(duì)蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)影響小。所以，遺傳密碼子的擴(kuò)展結(jié)合光點(diǎn)擊化學(xué)反應(yīng)可以對(duì)目標(biāo)蛋白進(jìn)行精確定位，并可清晰展示其動(dòng)態(tài)行為，這就能夠滿足微絲骨架動(dòng)態(tài)組裝機(jī)制研究的需求。

該研究通過基因編碼的方法實(shí)現(xiàn)了AcrK在大腸桿菌和哺乳動(dòng)物細(xì)胞中蛋白的特異性插入，并在365 nm紫外或405 nm激光激發(fā)下與四唑化合物進(jìn)行點(diǎn)擊化學(xué)反應(yīng)，實(shí)現(xiàn)了大腸桿菌細(xì)胞骨架蛋白FtsZ的活細(xì)胞熒光標(biāo)記。同時(shí)在模式植物擬南芥中實(shí)現(xiàn)了基因密碼子的擴(kuò)展，這為我們利用基因編碼非天然氨基酸結(jié)合光點(diǎn)擊反應(yīng)研究植物微絲骨架的動(dòng)態(tài)組裝機(jī)制奠定了基礎(chǔ)。