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技術(shù)文章

操作各項ELISA試劑盒試驗中的細節(jié)問題

點擊次數(shù)：14469 發(fā)布時間：2019/10/31 8:54:16

在elisa試劑盒試驗中的各項操作細節(jié)有許多，如盡量少用排槍、勤換槍頭，細節(jié)決定成敗，這對于試驗室科研工作者來說也是如此。加樣時由低濃度向高濃度加，由于這樣能夠削減跳孔的幾率。而整個試驗的*后要害便是成果的處理辦法了，那么在在今日的技術(shù)文章中。

為您帶來的是ELISA試劑盒檢測成果分析辦法:

1：ELISA試驗中樣品都要做復(fù)孔或三孔，然后計算每個濃度規(guī)范品的均勻OD值，復(fù)孔的變異系數(shù)應(yīng)該小于20%。

2：均勻OD值減去空白孔的OD值。

3：制造規(guī)范曲線。

以減去本底后的OD值為X軸，規(guī)范品的濃度為Y軸，運用作圖軟件得出一個適宜的計算辦法。主張運用適宜的軟件來作圖，比方CurveExpert 1.4。這款軟件能夠給出許多種辦法(比方直線、半對數(shù)、對數(shù)、四參數(shù)方程等)并從中挑選一條*適宜的方程。要想檢驗?zāi)硹l曲線是否與表中數(shù)據(jù)符合，能夠?qū)⒁?guī)范品的濃度作為未知數(shù)，將對應(yīng)的OD值帶入該方程，計算出規(guī)范品的濃度，得到的成果應(yīng)該與實際濃度很挨近(+/-10%)。挑選擬合度的那條曲線。

如果呈現(xiàn)規(guī)范曲線的線性欠好，或平行性欠好(雙孔對照孔的OD值不同很大)，或呈現(xiàn)跳孔的現(xiàn)象，可能引起的原因有酶標板孔間彼此污染、洗板后未能盡快進行下一步操作、添加樣品或其它試劑時操作的辦法不對、孵育位置避光性不佳或蓋板膜沒有密封好使得水分蒸騰、酶標板孔問參加的試劑量不同，相對應(yīng)的解決辦法是加樣時請當(dāng)心勿將液體濺人另一孔中，人工洗板時也請當(dāng)心，勿將洗滌液濺人另一微孔中、在洗板后及時進行下一步操作、添加試劑時請懸空滴入，牢記勿將槍頭接觸到板孔內(nèi)，吸取不同試劑瓶中的液體時就要替換一次槍頭、確認孵育環(huán)境不透光，蓋板膜將酶標板密封好、運用已校正過的微量加樣器，如將次參加液體時槍頭上留有一滴的液體滴下，那么將今后槍頭上留有的液體也滴下，以保證參加液體體積的一致性。

原創(chuàng)作者：上海恒遠生物技術(shù)發(fā)展有限公司