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人甲型流感病毒抗原（Flu A-Ag）ELISA試劑盒的實驗原理

點擊次數(shù)：14911 發(fā)布時間：2016/5/6 14:09:27

人甲型流感病毒抗原（Flu A-Ag）elisa試劑盒實驗原理：
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人甲型流感病毒抗原（Flu A-Ag）表達。用純化的抗體包被微孔板，制成固相抗體，可與樣品中甲型流感病毒抗原（Flu A-Ag）相結合，經(jīng)洗滌除去未結合的抗體和其他成分后再與HRP標記的抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成*終的黃色。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），與CUTOFF值相比較，從而判定標本中人甲型流感病毒抗原（Flu A-Ag）的存在與否。
人甲型流感病毒抗原（Flu A-Ag）ELISA試劑盒操作步驟：
1.編號：將樣品對應微孔按序編號，每板應設陰性對照2孔、陽性對照2孔、空白對照1孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）
2.加樣：分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照 50µl。然后在待測樣品孔先
加樣品稀釋液 40µl，然后再加待測樣品 10µl。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，
3.溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育30分鐘。
4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶標試劑50µl，空白孔除外。
7.溫育：操作同 3。
8.洗滌：操作同 5。
9.顯色：每孔先加入顯色劑A50µl，再加入顯色劑B50µl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
10.終止：每孔加終止液50µl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
11.測定：以空白空調(diào)零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。
人甲型流感病毒抗原（Flu A-Ag）ELISA試劑盒計算和結果判定：
試驗有效性：陽性對照孔平均值≥1.00; 陰性對照平均值≤0.10臨界值（CUT OFF）計算：臨界值=陰性對照孔平均值+0.15陰性判定：樣品 OD 值< 臨界值（CUT OFF）者為人甲型流感病毒抗原（Flu A-Ag）陰性陽性判定：樣品 OD 值≥ 臨界值（CUT OFF）者為人甲型流感病毒抗原（Flu A-Ag）陽性。